艾滋病HIV常见检测方法

艾滋病通常不以某一症状作为诊断感染的依据，而是结合高危行为接触史和实验室检测结果作为诊断依据。常用的艾滋病实验室检测包括HIV抗体检测、抗原检测、病毒载量测定、核酸检测和CD4细胞计数等。HIV抗体检测是HIV感染诊断最常见的方法。病毒载量测定和CD4细胞计数是判断疾病进展和治疗时机、评价疗效和预后的两项重要指标。

1、HIV筛查试验

1.酶联免疫吸附试验（ELISA）:该试验可使用血液（包含血清、血浆和滤纸干血斑）、尿液样品进行检测，ELISA多为HIV抗体检测试剂。该试剂HIV抗原包被于固相载体，加入待测样品和酶标记的抗体，加入底物显色，用酶标仪测定结果，与试剂盒的质控组对照进行结果的判定。

2.化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）:这类试验采用发光或荧光底物，可使用血液(包含血清和血浆)、尿液样品，既可检测抗体，也可联合检测p24抗原（HIV第四代检测试剂为同时检测抗体和抗原的试剂，第四代检测试剂常用化学发光法，由于P24抗原产生于HIV感染早期，因此第四代试剂会比第三代试剂的窗口期提前，能够发现尚未产生抗体的急性期感染者）。该试剂的HIV抗原/抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原/抗体，加发光或荧光底物，用发光仪或荧光仪测定结果，与试剂盒的质控组对照进行结果的判定。

V快速检测（RT）:RT可以使用血液、口腔黏膜渗出液样品，是一种检测时间短（一般分钟内可以出结果），不需要其他辅助设备便可以完成的检测方法。包括免疫渗透试验，免疫层析试验，明胶颗粒凝集试验（PA）。

免疫渗滤试验：包括斑点ELISA和斑点免疫胶体金。HIV抗原点状或线状固定在包膜上，加待检样品，利用微孔滤膜的可滤过性使抗原抗体发生结合反应，若待测样品中有HIV抗体则会从而膜上抗原部位显示出有色斑点或条带，反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。

2、HIV抗体确证试验

由于初筛试剂的高敏感性及相应较低的特异性，使初筛检测结果会出现假阳性，某些疾病的干扰也会造成假阳性结果的出现，如患免疫系统疾病或怀孕等都有可能出现假阳性，需要进一步通过确证试验才能最终判定是否感染HIV。确证试验也是一种抗体检测方法，常用免疫印迹试验（WB），可使用血清、血浆和滤纸干血斑样品。该试剂的包膜上含有HIV的各类特异性抗原，包括膜区抗原gp160、gp120和gp41，核心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51和p31，另外还有HIV-2型特异性抗原，待测样品中若含有HIV抗体，就会与膜条上抗原带相结合，加入抗人-IgG酶结合物和底物后，根据出现条带情况,按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。

3、HIV核酸检测

HIV核酸检测分为核酸定性检测和核酸定量检测（HIV病毒载量检测）。直接检测血液中是否存在病毒核酸，诊断有无病原体感染，HIV核酸检测一般作为诊断HIV的辅助性检测手段。

V核酸定性检测:可以使用血浆、血清、组织器官或血液制品等用于检测HIV的RNA和DNA。国内生产的用于核酸检测试剂主要为Taqman实时荧光PCR检测试剂，检测原理为Taqman实时荧光PCR扩增检测，检测靶基因为多聚酶区整合酶基因。检测结果显示有反应或检测到，报告本次实验核酸阳性；检测结果显示无反应或未检测到，报告本次实验核酸阴性。核酸定性检测还需结合流行病学史、临床病史和实验室相关指标进行综合判断。

V核酸定量检测:HIV核酸定量检测原理主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增两种方法。我国实验室常用国内外生产的实时荧光定量RT-PCR靶核酸扩增试剂（荧光探针法）。测定每毫升中病毒的拷贝数量（CPs/ml）。检测值5000CPs/ml，报告检测值；检测值5000CPs/ml，尽快再次严格按核酸检测的要求采样检测，报告检测值，结果5000CPs/ml，报告检测值，结果仍5000CPs/ml，则需充分结合流行病学史、临床病史、CD4+T淋巴细胞计数和HIV抗体随访检测结果等进行综合判断。不同时间的两次定量检测有助于准确判断结果。